اخیراً روشی قابل اعتماد، بسیار حساس و سریع برای تشخیص انواع بیماری‌های عفونی انسان ساخته شده است. به این روش «آنالیز PCR» می گویند. این چیست، ماهیت آن چیست، چه میکروارگانیسم هایی را می تواند آشکار کند و چگونه آن را به درستی مصرف کنیم، در مقاله خود خواهیم گفت.
تاریخچه کشف
روش واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) را توسط دانشمند آمریکایی Kary Mullis در سال 1983 اختراع کرد. در ابتدا، روش تشخیصی توسط شرکت Cetus ثبت شد که سازنده آن در آن کار می کرد. اما در سال 1992 تمام حقوق و پتنت ها به هافمن لاروش فروخته شد. پس از آن مشخص شد که مطالعات مشابهی به صورت موازی انجام شده و توسط سایر زیست شناسان آمریکایی مانند آلیس چن، دیوید ادگار، جان ترل ثبت شده است. در سال 1980، دانشمندان شوروی A. Slyusarenko، A. Kaledin و S. Gorodetsky نیز با این مشکل برخورد کردند. بنابراین، تعیین تنها دارنده حق چاپ غیرممکن بود. بسیاری از بیوشیمی دانان برجسته سهم خاصی در توسعه تکنیک واکنش زنجیره ای پلیمراز داشته اند و نوآوری های خود را به ثبت رسانده اند. در حال حاضر، تجزیه و تحلیلPCR در همه جا در آزمایشگاه های مجهز انجام می شود.
ماهیت روش تشخیصی PCR
تجزیه و تحلیل PCR: چیست و چگونه کار می کند؟ ماهیت روش افزایش حجم یک محیط میکروبی خاص در شرایط مصنوعی با استفاده از آنزیم DNA پلیمراز ویژه است. برای این کار، مواد DNA موجود چندین برابر می شود. بنابراین در صورت وجود یک میکروارگانیسم بیماری زا در نمونه، مقدار آن به دلیل دستکاری های آزمایشگاهی بیوشیمیایی افزایش می یابد و تشخیص باکتری در زیر میکروسکوپ دشوار نخواهد بود.
تحقیق مواد چگونه انجام می شود؟
مورد نیاز برای تجزیه و تحلیل:
- ماتریس DNA;
- پرایمرهای اتصال انتهای یک قطعه مواد؛
- آنزیم DNA پلیمراز مقاوم در برابر حرارت؛
- مواد شیمیایی که باعث می شود آنزیم ها به درستی کار کنند؛
- محلول بافر لازم برای ایجاد شرایط مناسب برای رشد و توسعه مواد DNA.
برای انجام PCR، 25-30 تکرار انجام می شود که شامل سه مرحله است: دناتوراسیون، بازپخت و طویل شدن.
برای تجزیه و تحلیل واکنش زنجیره ای پلیمری، از یک دستگاه ویژه - تقویت کننده استفاده می شود. تجهیزات مدرن به شما این امکان را می دهد که برنامه لازم را برای لوله های گرمایش و سرمایش تنظیم کنید تا خطاها در حین تشخیص برطرف شود.
تشخیص کجا استفاده می شود؟
روش واکنش زنجیره ای پلیمری در زمینه های مختلف پزشکی استفاده می شود:
- جنایتکاران بامواد ژنتیکی مانند مو، بزاق یا خون را شناسایی می کند؛
- آزمایش خون PCR به ژنوتیپ کمک می کند، به عنوان مثال، برای تشخیص یک واکنش ژنتیکی ذاتی فردی به یک داروی خاص؛
- استفاده از این روش برای ایجاد پیوندهای خانوادگی بین افراد؛
- محبوب ترین روش PCR در تشخیص پزشکی برای تعیین بیماری های عفونی مختلف تبدیل شده است.
PCR چه عفونت هایی را تشخیص می دهد؟
بنابراین، پزشکی برای مدت طولانی و با موفقیت از آنالیز PCR استفاده کرده است. آنچه هست، ما قبلاً می دانیم. و چه عوامل بیماری زا را می توان با آن تشخیص داد؟ بیماری های عفونی زیر با روش PCR تشخیص داده می شوند:
- هپاتیت A، B، C؛
- اورآپلاسموز؛
- کاندیدیاز؛
- کلامیدیا؛
- میکوپلاسموز؛
- gardnerellosis;
- مونونوکلئوز عفونی؛
- تریکومونیازیس;
- عفونت ویروس پاپیلوم؛
- سل؛
- عفونت تبخال انواع 1 و 2؛
- هلیکوباکتریوز؛
- سیتومگالوویروس؛
- دیفتری؛
- سالمونلوز؛
- عفونت HIV.
همچنین از روش‌های PCR در تشخیص سرطان استفاده می‌شود.
مزایای روش
تشخیص PCR چندین مزیت دارد:
- حساسیت بالا. حتی در حضور تنها چند مولکول DNA میکروارگانیسم، آنالیز PCR وجود عفونت را تعیین می کند. این روش به بیماری های مزمن و نهفته کمک می کند. اغلب در چنین مواردی، میکروارگانیسمدر غیر این صورت غیرقابل کشت است.
- هر ماده ای برای تحقیق مناسب است، مانند بزاق، خون، ترشحات تناسلی، مو، سلول های اپیتلیال. شایع ترین آنالیز خون و اسمیر ادراری تناسلی برای PCR است.
- نیازی به کشت بلندمدت نیست. فرآیند تشخیص خودکار به شما امکان می دهد پس از 4-5 ساعت نتایج مطالعه را دریافت کنید.
- روش تقریباً 100٪ قابل اعتماد است. فقط موارد جدا شده از نتایج منفی کاذب ثبت شده است.
- توانایی شناسایی چندین نوع پاتوژن از یک نمونه ماده واحد. این نه تنها روند تشخیص بیماری را تسریع می کند، بلکه هزینه های مواد را نیز به میزان قابل توجهی کاهش می دهد. اغلب پزشک یک تجزیه و تحلیل جامع PCR را تجویز می کند. قیمت معاینه، که شامل تعیین شش عامل بیماری زا است، حدود 1500 روبل است.
توصیه هایی برای آماده شدن برای تجزیه و تحلیل
برای اینکه نتایج در طول مطالعه PCR قابل اعتماد باشد، باید آزمایش را انجام دهید، با پیروی از توصیه‌های آمادگی اولیه برای تشخیص:
- قبل از اهدای بزاق، ۴ ساعت قبل از نمونه گیری از خوردن و مصرف دارو خودداری کنید. بلافاصله قبل از عمل، دهان خود را با آب جوشانده بشویید.
- هنگام نمونه برداری از سطح داخلی گونه نیز باید قوانین فوق را رعایت کرد. پس از شستشو، ماساژ ملایم پوست برای برجسته کردن ترشح غده توصیه می شود.
- ادرار معمولاً در خانه جمع آوری می شود. برای انجام این کار، شما نیاز به یک توالت کامل داریداندام تناسلی 50-60 میلی لیتر ادرار را در یک ظرف پلاستیکی استریل جمع آوری کنید. برای اطمینان از خلوص مواد، به خانم ها توصیه می شود تامپون را داخل واژن قرار دهند و به آقایان تا حد امکان چین های پوست را عقب بکشند. در طول قاعدگی کمک مالی نکنید.
- برای اهدای اسپرم باید 3 روز قبل از نمونه گیری از رابطه جنسی خودداری کنید. پزشکان همچنین توصیه می کنند از رفتن به سونا و حمام آب گرم، نوشیدن الکل و غذاهای تند خودداری کنید. شما باید 3 ساعت قبل از آزمایش از ادرار کردن خودداری کنید.
- برای گرفتن اسمیر دستگاه ادراری تناسلی، به عنوان مثال، اگر آزمایش PCR برای کلامیدیا انجام شود، به زنان و مردان توصیه می شود که به مدت 3 روز استراحت جنسی داشته باشند. داروهای ضد باکتری نباید 2 هفته قبل از تجزیه و تحلیل مصرف شود. به مدت یک هفته، شما باید استفاده از ژل های صمیمی، پمادها، شیاف های واژینال، دوش را متوقف کنید. 3 ساعت قبل از معاینه باید از ادرار کردن خودداری کنید. در دوران قاعدگی نمونه برداری انجام نمی شود، فقط 3 روز پس از قطع ترشحات می توانید اسمیر ادراری تناسلی بگیرید.
PCR در دوران بارداری
در طول دوره انتظار نوزاد، بسیاری از عفونت های مقاربتی برای رشد طبیعی جنین بسیار خطرناک هستند. بیماری های مقاربتی می تواند باعث کندی رشد داخل رحمی، سقط جنین یا زایمان زودرس، ناهنجاری های مادرزادی کودک شود. بنابراین، انجام آزمایش PCR در اوایل بارداری بسیار مهم است. لازم است تجزیه و تحلیل پس از ثبت نام - تا 12 هفته.
مواد از کانال دهانه رحم با استفاده از برس مخصوص گرفته می شود. این روش بدون درد است و خطری برای نوزاد ندارد. معمولاً در دوران بارداری، تجزیه و تحلیل کلامیدیا با روش PCR، و همچنین برای اوره پلاسموز، مایکوپلاسموز، سیتومگالوویروس، تبخال، ویروس پاپیلوم انجام می شود. چنین مجموعه ای از معاینات PCR-6 نامیده می شود.
PCR برای تشخیص HIV
با توجه به اینکه روش واکنش زنجیره ای پلیمراز نسبت به تغییرات بدن و شرایط تشخیص بسیار حساس است، عوامل زیادی می توانند نتیجه را تحت تاثیر قرار دهند. بنابراین، تجزیه و تحلیل PCR برای عفونت HIV روش قابل اعتمادی نیست، کارایی آن 96-98٪ است. در 4-2% موارد باقیمانده، آزمایش نتایج مثبت کاذب می دهد.
اما در برخی شرایط، تشخیص HIV PCR ضروری است. معمولاً به افرادی که نتیجه الایزا منفی کاذب دارند داده می شود. چنین شاخص هایی نشان می دهد که یک فرد هنوز آنتی بادی برای ویروس ایجاد نکرده است و نمی توان آنها را بدون افزایش چند برابری در تعداد تشخیص داد. این دقیقاً همان چیزی است که می توان با انجام آزمایش خون PCR به دست آورد.
این تشخیص ها برای کودکان سال اول زندگی که از مادر HIV مثبت متولد می شوند نیز ضروری است. این روش تنها راه برای تعیین مطمئن وضعیت کودک است.
PCR برای تشخیص هپاتیت
روش واکنش زنجیره ای پلیمراز امکان تشخیص DNA ویروس هپاتیت A، B، C را مدت ها قبل از تشکیل آنتی بادی های عفونت یا شروع علائم بیماری می دهد. آنالیز PCR برای هپاتیت C به ویژه موثر است، زیرا در 85٪ موارد این بیماری بدون علامت و بدوندرمان به موقع وارد مرحله مزمن می شود.
تشخیص به موقع پاتوژن به جلوگیری از عوارض و درمان طولانی مدت کمک می کند.
معاینه جامع PCR
تجزیه و تحلیل PCR پیچیده: چیست؟ این یک معاینه با استفاده از روش واکنش زنجیره ای پلیمری است که شامل تعیین چندین نوع عفونت به طور همزمان است: مایکوپلاسما ژنیتالیوم، مایکوپلاسما هومینیس، گاردنرلا واژینالیس، کاندیدا، تریکوموناس، سیتومگالوویروس، اورهاپلاسما اوره آلتیکوم، هرپس انواع 1 و گوارپیلوما2، ویروس هرپس نوع 1 و 2. قیمت چنین تشخیصی از 2000 تا 3500 روبل متغیر است. بسته به کلینیک، مواد و تجهیزات مورد استفاده، و همچنین بر اساس نوع تجزیه و تحلیل: کیفی یا کمی. آنچه در مورد شما ضروری است - پزشک تصمیم خواهد گرفت. در برخی موارد، فقط تعیین وجود پاتوژن کافی است، در برخی دیگر، به عنوان مثال، با عفونت HIV، تیتر کمی نقش مهمی ایفا می کند. هنگام تشخیص همه پاتوژن های فوق، معاینه "تحلیل PCR-12" نامیده می شود.
رونوشت نتایج تجزیه و تحلیل
رمزگشایی آنالیز PCR دشوار نیست. تنها 2 مقیاس از شاخص وجود دارد - "نتیجه مثبت" و "نتیجه منفی". هنگامی که یک عامل بیماری زا شناسایی می شود، پزشکان می توانند وجود بیماری را با اطمینان 99 درصد تایید کرده و درمان بیمار را آغاز کنند. با روش کمی برای تعیین عفونت، ستون مربوطه نشانگر عددی باکتری های شناسایی شده را نشان می دهد. فقط پزشک می تواند میزان بیماری را تعیین کرده و درمان لازم را تجویز کند.
در برخی موارد، به عنوان مثال، هنگام تعیین عفونت HIV با PCR، با نتیجه منفی، انجام معاینات تکمیلی برای تأیید شاخص های به دست آمده ضروری می شود.
کجا باید آزمایش داد؟
آزمایش PCR را در کجا انجام دهیم: در یک کلینیک دولتی یا در یک آزمایشگاه خصوصی؟ متأسفانه در موسسات درمانی شهرداری، تجهیزات و روش ها اغلب قدیمی هستند. بنابراین بهتر است آزمایشگاه های خصوصی با تجهیزات مدرن و پرسنل مجرب در اولویت قرار گیرند. علاوه بر این، در یک کلینیک خصوصی، خیلی سریعتر به نتیجه خواهید رسید.
در مسکو، بسیاری از آزمایشگاه های خصوصی آنالیز PCR را برای عفونت های مختلف ارائه می دهند. به عنوان مثال، در کلینیک هایی مانند Vita، Complex Clinic، Happy Family، Uro-Pro، آنالیز PCR انجام می شود. قیمت معاینه از 200 روبل است. برای شناسایی یک پاتوژن.
می توان نتیجه گرفت که تشخیص بیماری های عفونی با روش PCR در بیشتر موارد یک راه سریع و قابل اعتماد برای تشخیص پاتوژن در بدن در مراحل اولیه عفونت است. اما هنوز، در موارد خاص، ارزش انتخاب روش های تشخیصی دیگر را دارد. فقط یک متخصص می تواند نیاز به چنین مطالعه ای را تعیین کند. رمزگشایی تجزیه و تحلیل PCR نیز نیازمند یک رویکرد حرفه ای است. توصیه های پزشک خود را دنبال کنید و آزمایشاتی را که نیاز ندارید انجام ندهید.
