هپاتیت C عفونت کبد ناشی از ویروس Flaviviridae HCV است که از یک یا چند مولکول RNA تشکیل شده است. به عنوان یک قاعده، یک سری اقدامات تشخیصی برای ایجاد هپاتیت C در یک بیمار انجام می شود. PCR تجزیه و تحلیلی است که به طور دقیق تشخیص را تأیید می کند. اغلب اوقات نتیجه گیری توسط پزشکان زمانی ارائه می شود که بیمار از قبل اولین علائم بیماری را داشته باشد.
هپاتیت C چیست
آسیب کبدی ناشی از عفونت ویروسی که از طریق خون یا تماس جنسی منتقل می‌شود، در پزشکی هپاتیت C نامیده می‌شود. عامل ایجادکننده آن یک ویروس حاوی RNA از عوامل عفونی غیر سلولی از خانواده Flaviviridae است. عفونت می تواند برای مدت طولانی بدون اینکه خود را نشان دهد در بدن باقی بماند. بنابراین، تنها زمانی که یک میکروارگانیسم با استفاده از آزمایش خون با استفاده از PCR RNA RNA شناسایی شود، هپاتیت C (به عنوان یک تشخیص) موجه در نظر گرفته می شود.
Flavivirus در سلول های جدا شده به طور مصنوعی تولید نمی شود. در فرآیند تولید مثل، عامل عفونی تغییرات ایمونولوژیکی متمایز ایجاد می کند. این عوامل مانع از دادن بدن می شودپاسخ محافظتی مناسب، و متخصصان در ساخت واکسن موثر مشکل دارند.
ویروس از راه تزریقی منتقل می شود. برای عفونت، باید به مقدار کافی مستقیماً وارد جریان خون شود.
چه آزمایشاتی برای هپاتیت C انجام می شود
آسیب شناسی ویروسی کبد با استفاده از آزمایشات آزمایشگاهی تشخیص داده می شود. مطالعات بالینی هپاتیت C با مطالعه آنتی ژن های خارجی و خطرناک یا ترکیبات پروتئینی (آنتی بادی) در بیومتریال بیمار، عمدتاً در خون انجام می شود.
- ایمونواسی آنزیمی (ELISA). این روش مبتنی بر تشخیص آنتی بادی های lgM در خون است. ایمونوگلوبولین بزرگترین در نظر گرفته می شود و یک پنتامر است. این خود را در پاسخ محافظ اولیه لنفوسیت ها به یک ماده خارجی ناشناخته نشان می دهد.
- رادیوایمونواسی (RIA) - تعیین کمی ایمونوگلوبولین lgM با استفاده از ایزوتوپ رادیواکتیو نشاندار شده از ید.
- PCR هپاتیت C - تعیین RNA ویروسی در بیومتریال (خون). این تجزیه و تحلیل به طور قابل اعتماد تشخیص را تأیید می کند.
آزمایش IgG قابل اعتماد نیست. وجود آن در سرم خون نه تنها می تواند نشان دهنده وجود یک فلاوی ویروس باشد، بلکه همچنین نشان دهنده عفونت دیگری در گذشته است که همان پاتوژن را دارد.
چه چیزی آنالیز PCR را تعیین می کند
واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) بر اساس شناسایی مناطق DNA خاص برای پاتوژن های خاص در نمونه های مواد برای تحقیق (اپیتلیوم، خون) است.این تجزیه و تحلیل، شناسایی کوچکترین ارگانیسم های بیماری زا (ویروس ها) را با شناسایی RNA یا DNA آنها در مواد بیولوژیکی ممکن می سازد.
روش آزمایشگاهی برای تشخیص آنتی بادی هپاتیت C PCR در 3 مرحله انجام می شود:
- انتخاب کنید. بیومتریال مورد مطالعه از ناخالصی ها خالص شده و DNA در فاز متحرک ستون کروماتوگرافی به دست می آید.
- تقویت. تجزیه و تحلیل در چرخه ساز ترموستات دستگاه انجام می شود. لوله های آزمایش را با چرخه خاصی گرم و سرد می کند. برای یک مطالعه، حداکثر 35 سیکل انجام می شود. نتیجه، تعداد کافی قطعات DNA برای شناسایی، شناسایی و ارزیابی پاتوژن است.
- الکتروفورز. قطعات به دست آمده در ژل با اشباع متفاوت آگارز قرار داده شده و الکتروفورز انجام می شود. الکتروفروگرام به دست آمده روی کامپیوتر آنالیز می شود.
نه تنها از مطالعه استاندارد PCR استفاده می شود، بلکه از آنالیز Real Time PCR نیز استفاده می شود. این تشخیص زمان واقعی است. این روش امکان تجزیه و تحلیل کیفی و کمی را فراهم می کند که امکان شناسایی شکل گیری و پویایی بیماری و همچنین تجویز درمانی با هدف از بین بردن علت منشأ آسیب شناسی را فراهم می کند. Real-time PCR همچنین برای تعیین کشت خالص عوامل عفونی (ژنوتیپ) استفاده می شود.
آزمایش واکنش زنجیره ای پلیمراز چگونه انجام می شود
برای تشخیص، می توان از هر مایع بیولوژیکی انسانی استفاده کرد. مواد زیستی برای آزمایش هپاتیت C معمولاً خون است.
نمونه گیری برای تشخیص در رویه انجام می شوددفتر. برای خون گیری از لوله های آزمایش یکبار مصرف با ماده ای که از لخته شدن خون جلوگیری می کند استفاده کنید. فعالیت های متمرکز بر جلوگیری از انتشار عوامل عفونی به جلوگیری از ورود گونه دیگری از میکروارگانیسم ها از خارج کمک می کند.
خون برای PCR هپاتیت C صبح ها با معده خالی گرفته می شود. نمونه بلافاصله به آزمایشگاه ارسال می شود. مجاز به نگهداری بیومواد در دمای +4 تا +8 درجه سانتیگراد است. ظروف برچسب گذاری شده و با دستورالعمل ارائه شده است. نتایج آزمایش ظرف 48 ساعت در دسترس است، گاهی اوقات زودتر.
انواع PCR
دامنه کاربرد واکنش زنجیره ای پلیمراز بسیار گسترده است. متخصصان عفونی با استفاده از PCR هپاتیت B، بیماری های منتقل شده توسط حشرات خونخوار، ایدز، سل را تعیین می کنند. در انکولوژی با استفاده از این روش سلول های تومور در مراحل اولیه تشخیص داده می شوند.
حدود چهارده نوع تحلیل وجود دارد. استفاده از یک یا نوع دیگر بستگی به دامنه و نتایج نهایی تجزیه و تحلیل دارد. برخی از انواع PCR در مواردی که نیاز به نتیجه در عرض 20 دقیقه باشد، ضروری هستند.
برای تشخیص هپاتیت C از 3 نوع واکنش زنجیره ای پلیمراز استفاده می شود:
- ارزیابی کیفی می تواند مثبت باشد که نشان دهنده وجود عفونت در بدن باشد یا منفی باشد که نشان دهنده عدم وجود فلاوی ویروس باشد.
- Real-time PCR (تجزیه و تحلیل کمی) - RNA کمی پاتوژن را در واحد بین المللی در میلی لیتر تعیین می کند.
- ژنوتیپ تجزیه و تحلیلی است که نوع (ژنوتیپ) ویروس را نشان می دهد.
برای شناسایی و تعیین دقیق بیماری، به دنبال آنهر سه نوع مطالعه برای تجویز درمان بهینه استفاده می شود.
تجزیه و تحلیل واکنش زنجیره ای پلیمراز کیفی
تجزیه و تحلیل برای همه کسانی که ELISA دارند که آنتی بادی های HCV را شناسایی کرده است، اجباری است. PCR کیفی برای هپاتیت C تست استاندارد حساسیت است. هدف این روش تنها تشخیص است، هیچ شمارش یا جداسازی سایر مواد انجام نمی‌شود.
برای تشخیص آنتی بادی ها، از سیستم های آزمایشی ویژه ای با آستانه حساسیت حداقل IU/ml 50 استفاده می شود. در صورت تشخیص آنتی بادی، آزمایش های شفاف کننده دیگری تجویز می شود. اگر نتیجه منفی باشد، آزمایش دیگری انجام نخواهد شد.
در برخی موارد، یک نتیجه منفی کاذب ممکن است به دلیل بی کفایتی کارکنان آزمایشگاه یا معرف های بی کیفیت باشد. برای بیمه، بهتر است آنالیز را در جای دیگری انجام دهید.
PCR کمی
این روش برای مطالعه مستقیم تعداد فلاوی ویروس در یک چرخه واکنش استفاده می شود. برای اندازه گیری دقیق، قطعات DNA مورد استفاده برای هیبریداسیون یا پرایمرهای نشاندار شده با فلورسنت استفاده می شود. یک گزینه تشخیص اقتصادی با استفاده از رنگ سبز SYBL وجود دارد. رنگ در یک شیار کوچک در DNA فرو می‌رود و وقتی با لیزر تابش می‌شود آبی می‌شود.
غلظت توسط دستگاه تقویت کننده در معادل دیجیتال تعیین می شود. مقادیر ممکن است بین آزمایشگاه‌ها کمی متفاوت باشد و بنابراین باید با مقادیر مرجع مقایسه شوند.
PCR کمیهپاتیت C به انتخاب دوز بهینه داروها و تعیین مدت زمان درمان کمک می کند. فراوانی مطالعه بستگی به مرحله بیماری، نوع ژنوتیپ و دوره درمان تجویز شده دارد.
تعیین ژنوتیپ
ویروس هپاتیت C ساختار ژنتیکی متغیری دارد. تغییرات متعدد ایجاد واکسن را غیرممکن می کند و همچنین درمان را پیچیده می کند. در مجموع 11 ژنوتیپ و 100 زیرگروه شناسایی و ثبت شده است. در کشورهای اتحاد جماهیر شوروی سابق، در افراد آلوده به هپاتیت C، PCR عمدتا ژنوتیپ های 1b و 3 را شناسایی می کند.
در حضور هر یک از ژنوتیپ ها، سیروز یا سرطان کبد می تواند شادی کند. به همین دلیل تشخیص به موقع ویروس بسیار مهم است.
برای برخی بیماران، داروهای خاصی که برای مبارزه با HCV طراحی شده اند سمی هستند. ژنوتیپ به شما امکان می دهد نوع پروتئین را تعیین کنید و یک داروی موثر را تجویز کنید.
در نتایج آزمایشات تایپ عددی با حروف کوچک لاتین وجود دارد که نشان دهنده ژنوتیپ ویروس است. اگر HCV تشخیص داده شود اما تایپ نشده باشد، به این معنی است که فرد دارای ژنوتیپی است که برای یک منطقه جغرافیایی خاص معمول نیست.
نتایج تجزیه و تحلیل
پزشک با رمزگشایی نتایج سروکار دارد. فقط داده های چندین مطالعه (به همراه تاریخچه و معاینه) می توانند تصویر واقعی کلی از تاریخچه پزشکی ارائه دهند.
- در یک فرد سالم، آزمایش واکنش کیفی در بیومتریال چیزی را تشخیص نمی دهد. اگر مقدار "تشخیص داده شده" نشان داده شود، عفونت تایید می شود و بیمارنیاز به تشخیص بیشتر و سپس درمان دارد.
- تعیین تعداد عوامل عفونی امکان ارزیابی بار ویروسی روی بدن را فراهم می کند. به طور معمول، PCR کمی هپاتیت C عامل بیماری زا را شناسایی نمی کند. نشانگر تا 810^5 به عنوان یک بار کم در نظر گرفته می شود و با درمان مناسب، نتیجه مطلوب را تضمین می کند. مقادیر بالاتر نیاز به معاینه عمیق و تعیین درمان طولانی مدت دارد که هیچ کس نمی تواند نتیجه مثبت آن را تضمین کند.
- نتایج مثبت ژنوتیپ نشان می دهد که کدام ژنوتیپ شناسایی شده است. یک نتیجه منفی نشان دهنده عدم وجود فلاوی ویروس یا وجود ژنوتیپی است که برای این منطقه معمولی نیست.
آزمایش PCR مثبت چه چیزی را نشان می دهد
هر بیماری جدی نیاز به تشخیص جامع دارد. یک PCR مثبت هپاتیت C تشخیص را تأیید می کند، اما پیش بینی فقط پس از مطالعات آزمایشگاهی و ابزاری اضافی انجام می شود.
تشخیص ویروس تصویر کاملی از آسیب شناسی به دست نمی دهد. لازم است نوع و ماهیت آن شناسایی شود تا مشخص شود که چگونه بر کبد و سایر اندام ها تأثیر می گذارد. تشخیص زودهنگام HCV اغلب نتیجه درمانی مطلوبی دارد.
PCR منفی با الایزا مثبت
هنگام مشاهده علائم مشخصه آسیب کبدی، احتمال زیادی وجود دارد که عفونت قبلاً وارد بدن شده باشد. بنابراین، شما باید با یک متخصص کبد یا یک متخصص بیماری های عفونی تماس بگیرید. در طول مصاحبه، متخصص یک سرگذشت جمع آوری می کند و معاینه لازم را تجویز می کند.
اگرنتایج مطالعات بر روی هپاتیت C PCR منفی است و ایمونواسی آنزیمی مثبت است، این نشان دهنده وجود آنتی بادی برای فلاوی ویروس در خون است. این معمولا زمانی اتفاق می افتد که عفونت به مقدار کمی وارد بدن شود، بنابراین سیستم ایمنی به تنهایی با آن مقابله می کند. اما چنین افرادی همچنان آلوده به حساب می آیند و لازم است هر 6 ماه یکبار معاینه شوند. اگر با چنین نتایج آزمایشی از معاینه رایگان پزشکی محروم شد، بهتر است برای حفظ سلامتی با پرداخت هزینه ای PCR انجام دهد و در صورت مثبت بودن نتایج، برای تشخیص و درمان با متخصص تماس بگیرید.
مزایا و معایب روش
هنگام ایجاد تشخیص هپاتیت C، PCR چندین مزیت دارد:
- تشخیص زودرس پاتوژن.
- تعریف دقیق ویروس.
- کارایی تشخیص.
- حداقل میزان خطا.
- حساسیت بالا.
معایب روش:
- هزینه بالای تجزیه و تحلیل. این آزمایش به تجهیزات گران قیمت، معرف ها و کادر پزشکی بسیار ماهر نیاز دارد. همه با هم به مقدار قابل توجهی می رسند.
- شرایط سختگیرانه برای حمل و نقل مواد زیستی.
درمان التهاب کبد
آنالیز PCR برای ویروس هپاتیت C برای تشخیص اساسی در نظر گرفته می شود، اما قطعی نیست. برای مؤثر بودن درمان، تعدادی مطالعات آزمایشگاهی و ابزاری اضافی مورد نیاز است. بعد از گذشتن از همهاقدامات تشخیصی که پزشک درمان را تجویز می کند:
- رژیم شماره 5 تجویز می شود.
- الکل کاملاً مستثنی است.
- دریافت مشترک اینترفرون و ریباویرین به مدت 25 روز.
- دوره های محافظ کبد "Essentiale"، "Karsil"، "Phosphogliv".
- در موارد خاص از پلاسمافرزیس گسسته استفاده می شود.
داروهای تجویز شده توسط متخصص کبد به طور منظم و بدون تغییر دوز مصرف می شوند. مدت زمان مصرف داروها پس از گذراندن تست های کنترلی توسط پزشک تعیین می شود. پس از اتمام دوره درمان، باید هر شش ماه یکبار به پزشک مراجعه کنید.
تشخیص PCR امکان شناسایی عامل ایجاد کننده هپاتیت C را در مراحل اولیه فراهم می کند. این به اثربخشی درمان و جلوگیری از انتقال بیماری به اشکال خطرناکی مانند سیروز و کارسینوم کبدی کمک می‌کند.
