مطالعه باکتری ها از اهمیت عملی زیادی برای انسان برخوردار است. تا به امروز تعداد زیادی پروکاریوت کشف شده است که از نظر بیماری زایی، ناحیه توزیع، شکل، اندازه، تعداد تاژک ها و سایر پارامترها با یکدیگر تفاوت دارند. برای بررسی دقیق این سویه از روش تحقیق باکتریولوژیک استفاده می شود.
روش های آنالیز سلول های باکتریایی چیست؟
برای تشخیص بیماری زا بودن باکتری ها، کشت به روش های مختلف مورد بررسی قرار می گیرد. از جمله:
1. روش باکتریوسکوپی.
2. روش باکتریولوژیک.
3. روش بیولوژیکی.
روش های تحقیقاتی باکتریوسکوپی و باکتریولوژیکی مستقیماً بر اساس کار با سلول های پروکاریوتی است، زمانی که برای مطالعه تأثیر چنین سلول هایی بر روی ارگانیسم زنده حیوانات آزمایشی نیاز به تجزیه و تحلیل بیولوژیکی است. با توجه به درجه تظاهر علائم خاصی از بیماری، دانشمند می تواند بسازدنتیجه گیری در مورد وجود یا عدم وجود باکتری های بیماری زا در نمونه و همچنین تکثیر طبیعی آنها در بدن حیوان برای به دست آوردن کشت و استفاده در کارهای دیگر.
روش تحقیق باکتریولوژیک با باکتریوسکوپی متفاوت است. در مرحله اول، از یک کشت مخصوص تهیه شده از پروکاریوت های زنده برای تجزیه و تحلیل استفاده می شود، در حالی که در دوم، کار با سلول های مرده یا زنده روی یک لام شیشه ای انجام می شود.
مراحل روش تحقیق باکتریولوژیک. میکروبیولوژی
اصل مطالعه خواص یک کشت باکتریایی می تواند هم برای میکروبیولوژیست هایی که هدفشان مطالعه سلول های پروکاریوتی است و هم برای تکنسین های آزمایشگاهی که وظیفه آنها تشخیص بیماری زایی یا غیر بیماری زایی باکتری ها است مفید باشد. سپس بیمار را تشخیص دهید.
روش مطالعه باکتری ها به سه مرحله تقسیم می شود:
1. جداسازی باکتری از نمونه اصلی.
2. کاشت باکتری و پرورش کشت خالص و مطالعه خواص آن.
3. مطالعه دقیق سلول های باکتریایی.
مرحله اول
نمونه یا اسمیر از سطح آزاد محیط یا از بیمار گرفته می شود. بنابراین، ما یک "کوکتل" از بسیاری از انواع باکتری ها را دریافت می کنیم که باید روی یک محیط غذایی کاشته شوند. گاهی اوقات می توان بلافاصله باکتری های لازم را با دانستن کانون های توزیع آنها در بدن جدا کرد.
پس از دو یا سه روز، کلنی های مورد نظر انتخاب می شوند وروی محیط جامد ظروف پتری با کمک یک حلقه استریل کاشته می شوند. بسیاری از آزمایشگاه ها با لوله های آزمایشی کار می کنند که می توانند حاوی مواد مغذی جامد یا مایع باشند. روش تحقیق باکتریولوژیک در میکروبیولوژی به این صورت است.
مرحله دوم
پس از به دست آوردن کلونی های جداگانه باکتری، آنالیز مستقیم ماکرو و میکرو انجام می شود. تمام پارامترهای کلنی ها اندازه گیری می شود، رنگ و شکل هر یک از آنها تعیین می شود. غیر معمول نیست که کلنی ها را روی یک ظرف پتری و سپس در مواد اولیه بشمارید. این در تجزیه و تحلیل باکتری های بیماری زا، که تعداد آنها به درجه بیماری بستگی دارد، مهم است.
روش تحقیق باکتریولوژیک که مرحله دوم آن مطالعه کلنی های منفرد میکروارگانیسم ها است، می تواند با روش بیولوژیکی برای آنالیز باکتری ها همراه باشد. یکی دیگر از اهداف کار در این مرحله افزایش مقدار منبع منبع است. این را می توان روی یک محیط غذایی انجام داد، یا می توانید آزمایشی را در داخل بدن روی موجودات زنده آزمایشی انجام دهید. باکتری های بیماری زا تکثیر می شوند و در نتیجه خون حاوی میلیون ها سلول پروکاریوتی خواهد بود. تهیه مواد لازم برای باکتری از خون گرفته شده آسان است.
مرحله سوم
مهمترین بخش مطالعه تعیین خواص مورفولوژیکی، بیوشیمیایی، سمی و آنتی ژنی کشت باکتریایی است. کار با کشت های از قبل تمیز شده روی یک محیط غذایی و همچنین با آماده سازی (اغلب رنگ آمیزی شده) در زیر میکروسکوپ انجام می شود.
مالکیت را تنظیم کنیدباکتری های بیماری زا یا فرصت طلب به یک یا گروه دیگر سیستماتیک، و همچنین برای تعیین مقاومت آنها در برابر داروها، اجازه می دهد تا روش باکتریولوژیکی تحقیق. مرحله 3 - آنتی بیوتیک ها، یعنی تجزیه و تحلیل رفتار سلول های باکتریایی در شرایط محتوای داروها در محیط.
مطالعه مقاومت آنتی بیوتیکی یک فرهنگ زمانی از اهمیت عملی بالایی برخوردار است که نیاز به تجویز داروهای ضروری و مهمتر از همه موثر برای یک بیمار خاص باشد. اینجاست که روش تحقیق باکتریولوژیک می تواند کمک کند.
محیط رشد چیست؟
برای رشد و تولید مثل، باکتری ها باید در محیط های غذایی از قبل آماده شده باشند. از نظر قوام، آنها می توانند مایع یا جامد، و از نظر منشاء - گیاهی یا حیوانی باشند.
نیازهای اساسی رسانه:
1. عقیمی.
2. حداکثر شفافیت.
3. شاخص های بهینه اسیدیته، فشار اسمزی، فعالیت آب و سایر مقادیر بیولوژیکی.
به دست آوردن کلنی های ایزوله
1. روش درایگالسکی این شامل این واقعیت است که یک اسمیر با انواع مختلف میکروارگانیسم ها روی حلقه باکتری اعمال می شود. این حلقه در امتداد اولین ظرف پتری با یک محیط مغذی رد می شود. علاوه بر این، بدون تغییر حلقه، روش مواد باقیمانده روی ظروف پتری دوم و سوم انجام می شود. بنابراین، در آخرین نمونه های کلنی، باکتری ها خیلی متراکم نمی شوند، در نتیجه توانایی یافتن موارد ضروری برای کار ساده می شود.باکتری.
2. روش کخ از لوله های آزمایشی با محیط مغذی مذاب استفاده می کند. یک حلقه یا پیپت حاوی اسمیر باکتری در آنجا قرار می گیرد و پس از آن محتویات لوله آزمایش روی یک صفحه مخصوص ریخته می شود. آگار (یا ژلاتین) پس از مدتی جامد می شود و به راحتی می توان کلنی های سلولی مورد نظر را در ضخامت آن پیدا کرد. رقیق کردن مخلوط باکتری ها در لوله های آزمایش قبل از شروع کار بسیار مهم است تا غلظت میکروارگانیسم ها خیلی زیاد نباشد.
روش تحقیق باکتریولوژیک که مراحل آن بر اساس جداسازی کشت مورد نظر باکتری است، بدون این دو روش برای یافتن کلنی های جدا شده عمل نمی کند.
آنتی بیوگرام
از نظر دیداری، واکنش باکتری ها به داروها را می توان به دو روش عملی مشاهده کرد:
1. روش دیسک کاغذی.
2. پرورش باکتری و آنتی بیوتیک در محیط مایع.
روش دیسک کاغذی نیازمند کشت میکروارگانیسم هایی است که روی یک محیط غذایی جامد رشد کرده اند. روی چنین محیطی چند تکه کاغذ گرد آغشته به آنتی بیوتیک قرار دهید. اگر دارو با موفقیت با خنثی سازی سلول های باکتریایی مقابله کند، پس از چنین درمانی، منطقه ای عاری از کلنی ها وجود خواهد داشت. اگر واکنش به آنتی بیوتیک منفی باشد، باکتری زنده می ماند.
در صورت استفاده از یک محیط غذایی مایع، ابتدا چندین لوله آزمایش با کشت باکتری با رقت های مختلف تهیه کنید. آنتی بیوتیک ها به این لوله های آزمایش اضافه می شود و روند تعامل بین ماده و میکروارگانیسم ها در طول روز مشاهده می شود. در نتیجه یک آنتی بیوگرام با کیفیت بالا به دست می آید که بر اساس آن امکان پذیر استدر مورد اثربخشی دارو برای یک محصول خاص قضاوت کنید.
وظایف اصلی تحلیل
در اینجا اهداف و مراحل روش تحقیق باکتریولوژیک ذکر شده است.
1. مواد اولیه ای را که برای جداسازی کلنی های باکتری استفاده می شود، بدست آورید. این می تواند یک لام از سطح هر شی، غشای مخاطی یا حفره اندام انسان، آزمایش خون باشد.
2. کشت کشت بر روی یک محیط غذایی جامد. پس از 24-48 ساعت، کلنی هایی از انواع مختلف باکتری ها روی ظرف پتری پیدا می شود. ما مورد نظر را با توجه به معیارهای مورفولوژیکی و / یا بیوشیمیایی انتخاب می کنیم و کارهای بعدی را با آن انجام می دهیم.
3. تکثیر فرهنگ حاصل. روش تحقیق باکتریولوژیک می تواند مبتنی بر روش مکانیکی یا بیولوژیکی افزایش تعداد کشت های باکتری باشد. در حالت اول، کار با مواد مغذی جامد یا مایع انجام می شود که روی آن باکتری ها در ترموستات تکثیر می شوند و کلنی های جدیدی را تشکیل می دهند. روش بیولوژیکی نیاز به شرایط طبیعی برای افزایش تعداد باکتری ها دارد، بنابراین در اینجا حیوان آزمایشی به میکروارگانیسم ها آلوده می شود. پس از چند روز، بسیاری از پروکاریوت ها را می توان در نمونه خون یا اسمیر یافت.
4. کار با فرهنگ خالص. برای تعیین موقعیت سیستماتیک باکتری ها و همچنین تعلق آنها به پاتوژن ها، لازم است تجزیه و تحلیل کامل سلول ها با توجه به ویژگی های مورفولوژیکی و بیوشیمیایی انجام شود. هنگام مطالعه گروه های بیماری زا از میکروارگانیسم ها، مهم است که بدانیمآنتی بیوتیک ها چقدر موثر هستند.
این یک ویژگی کلی روش تحقیق باکتریولوژیک بود.
ویژگی های تحلیل
قاعده اصلی تحقیقات باکتریولوژیک حداکثر عقیمی است. اگر با لوله‌های آزمایش کار می‌کنید، کشت‌ها و زیرکشت‌های باکتری‌ها باید فقط روی یک لامپ گرم شده انجام شود.
همه مراحل روش تحقیق باکتریولوژیک نیازمند استفاده از یک حلقه مخصوص یا پیپت پاستور است. هر دو ابزار باید از قبل در شعله یک لامپ الکلی درمان شوند. در مورد پیپت پاستور، در اینجا، قبل از استریلیزاسیون حرارتی، لازم است که نوک پیپت را با موچین بشکنید.
تکنیک کاشت باکتری نیز ویژگی های خاص خود را دارد. ابتدا هنگام تلقیح روی محیط جامد، یک حلقه باکتریایی از سطح آگار عبور داده می شود. البته حلقه باید قبلاً نمونه ای از میکروارگانیسم ها را روی سطح داشته باشد. تلقیح در محیط کشت نیز انجام می شود، در این صورت حلقه یا پیپت باید به ته ظرف پتری برسد.
هنگام کار با محیط مایع، از لوله های آزمایش استفاده می شود. در اینجا مهم است که اطمینان حاصل شود که مایعات با لبه‌های ظروف شیشه‌ای آزمایشگاهی یا درپوش‌ها تماس نگیرند و ابزار مورد استفاده (پیپت، حلقه) با اجسام و سطوح خارجی تماس نگیرد.
اهمیت روش تحقیق بیولوژیکی
تجزیه و تحلیل نمونه باکتری کاربردهای عملی خود را دارد. در درجه اولروش تحقیق باکتری شناسی را می توان در پزشکی مورد استفاده قرار داد. به عنوان مثال، مطالعه میکرو فلور بیمار به منظور ایجاد تشخیص صحیح و همچنین ایجاد دوره صحیح درمان ضروری است. یک آنتی بیوگرام در اینجا کمک می کند، که فعالیت داروها را در برابر پاتوژن نشان می دهد.
تجزیه و تحلیل باکتری ها در آزمایشگاه برای تشخیص بیماری های خطرناک مانند سل، تب عود کننده یا سوزاک استفاده می شود. همچنین برای مطالعه ترکیب باکتریایی لوزه‌ها، حفره‌های اندام استفاده می‌شود.
برای تعیین آلودگی محیط زیست می توان از روش تحقیق باکتریولوژیک استفاده کرد. با توجه به داده های مربوط به ترکیب کمی و کیفی یک اسمیر از سطح یک جسم، میزان جمعیت این محیط توسط میکروارگانیسم ها تعیین می شود.
