روش رنگ سنجی - تجزیه و تحلیل مبتنی بر مقایسه اشباع رنگ مواد مورد بررسی و شناخته شده. نتایج آزمایش‌های فیزیکی و شیمیایی برای بسیاری از شاخه‌های علوم ارزش زیادی دارد، اما بیشتر از همه تحقیقات در پزشکی مورد استفاده قرار می‌گیرد.
جوهر روش رنگ سنجی
انواع مختلفی از آزمایش ها وجود دارد که ترکیب شیمیایی مواد را تعیین می کند. برخی از آنها جهانی هستند و به طور گسترده در زمینه های مختلف استفاده می شوند، برخی دیگر خاص و با دقت بالاتر هستند. روش رنگ سنجی جهانی است.
ماهیت تجزیه و تحلیل در این واقعیت نهفته است که اشباع رنگ یک محلول با غلظت نامعلوم با رنگ یک محلول استاندارد مقایسه می شود. در طول تجزیه و تحلیل، در نتیجه تعامل جزء مورد بررسی با یک معرف خاص، یک ترکیب رنگی تشکیل می شود. پس از اتمام واکنش، سایه به دست آمده با رنگ محلول هایی که غلظت آن از قبل مشخص است مقایسه می شود.
اعتقاد بر این است که بنیانگذار رنگ سنجی رابرت بویل است. از فشار دادن استفاده کردتانن برای تشخیص آهن از مس در محلول. این بویل بود که متوجه شد هر چه غلظت آهن در محلول بیشتر باشد، رنگ دومی غنی‌تر می‌شود.
رنگ سنجی
رنگ سنجی روشی برای تعیین مقدار یک ماده در محلول ها است. تجزیه و تحلیل بر اساس قانون بوگر-لامبرت-بیر است: هنگامی که یک پرتو نور به یک لایه جذب کننده متراکم از یک ماده برخورد می کند، شدت آن ضعیف می شود.
روش رنگ سنجی برای تعیین غلظت یک ماده می تواند از مقایسه بصری یا مقایسه با استفاده از ابزارهای ویژه برای اندازه گیری شدت رنگ استفاده کند. مقایسه به صورت مستقیم و جبرانی انجام شده است.
- مستقیم. این روش شامل مقایسه سطح رنگ محلول آزمایش در یک چگالی و دمای معین مایع با یک محلول مرجع است. هنگام استفاده از فتوکلرومترها و اسپکتروفتومترها، از آب مقطر به عنوان محلول مرجع استفاده می شود. دستگاه ها شدت جریان را اندازه گیری می کنند که به شدت نور بستگی دارد.
- جبرانی. روش بر اساس آوردن رنگ نمونه مورد مطالعه به نمونه مرجع است. نتیجه با افزودن یک حلال یا افزایش ارتفاع لایه محیط رنگ‌آمیزی حاصل می‌شود.
استفاده از اسپکتروفتومتر، تک رنگ و سایر ابزارهای دقیق، روش ساده تحقیق را ساده تر کرده و به شما امکان می دهد دقت نتایج را افزایش دهید. این دستگاه ها قادر به اندازه گیری میزان عبور نور و تعیین طول موج هستند.
جایی که تحلیل اعمال می شود
روش آنالیز رنگ سنجی زمانی استفاده می شود که ترکیب شیمیایی دقیق مشخص باشد، نمونه مرجع برای مقایسه وجود داشته باشد و دمای آزمایش و نمونه مرجع یکسان باشد. اگر نیاز به تعیین سریع مقدار یک ماده رنگی دارید، اما آنقدر کم است که استفاده از روش تحلیلی غیرممکن است.
رنگ سنجی به طور گسترده در پزشکی برای تحقیقات بیوشیمیایی بالینی و سایر زمینه ها استفاده می شود:
- صنعت داروسازی؛
- صنایع غذا و الکل؛
- زراعت (تعیین کیفیت خاک).
مزایا و معایب
روش رنگ سنجی، مانند هر روش دیگری، مزایا و معایب دارد.
مزایا شامل موارد زیر است:
- سهولت تجزیه و تحلیل، حداقل مراحل آماده سازی؛
- امکان تست حتی با مقدار کمی مواد تست؛
- نیازی به تجهیزات گران قیمت نیست، اگرچه اخیراً دستگاه های مدرنی که ارزان نیستند به طور فزاینده ای مورد استفاده قرار گرفته اند. اما آنها دقیق ترین نتیجه را ارائه می دهند.
معایب: دقت پایین تجزیه و تحلیل در مقایسه با روش های تحلیلی.
روش بیورت برای تعیین پروتئین
پروتئین موجود در سرم خون شاخصی است که وضعیت هموستاز را منعکس می کند. افزایش غلظت یک ترکیب ماکرومولکولی در خون هیپرپروتئینمی و مقدار کم آن هیپوپروتئینمی نامیده می شود.
پروتئین درسرم خون دارای ترکیب، ساختار، خواص متفاوت است، عملکردهای متفاوتی را انجام می دهد. آنها به آنزیم ها، هورمون ها، ایمونوگلوبولین ها و غیره تقسیم می شوند. همه گروه های پروتئین دارای تعدادی ویژگی مشترک هستند که بر اساس آنها روش هایی برای تعیین ترکیبات آلی ماکرومولکولی در مایعات بیولوژیکی ایجاد شده است.
از همه روش های بیوشیمی بالینی، روش های رنگ سنجی برای تعیین پروتئین بیشتر استفاده می شود. آنها نسبتا ارزان هستند، که برای سازمان های بودجه مهم است. و کاملا ساده هستند. رایج ترین روش بیورت است. ماهیت روش: پروتئین ها در یک محیط قلیایی با سولفات مس واکنش داده و ترکیبات بنفش را تشکیل می دهند. محتوای پروتئین در خون با اشباع رنگ مشخص می شود. بیومتریال برای آنالیز صبح ها با معده خالی گرفته می شود.
تجزیه و تحلیل بسیار دقیق است، اما عواملی وجود دارد که بر غلظت پروتئین در خون تأثیر می گذارد:
- فعالیت بدنی اندکی قبل از نمونه برداری از مواد زیستی؛
- هفته های آخر بارداری و شیردهی؛
- استفاده از داروهای کورتیکوتروپین، میسکلرون، کلوفیبرات باعث افزایش محتوای پروتئین در خون می شود و استفاده از پیرازینامید و استروژن - برای کاهش غلظت؛
- موقعیت نادرست دست در هنگام نمونه برداری از مواد زیستی.
تعیین آهن
میزان آهن خون یکی از شاخص های اصلی در تشخیص بیماری های مختلف است. این ماده در هموگلوبین متمرکز شده است که انتقال اکسیژن به بافت ها را تضمین می کند. برایتعیین آهن با روش رنگ سنجی، اغلب از محلول باتوفنانترولین (0.02٪) به عنوان معرف اصلی استفاده می شود. بیومتریال - سرم بدون اثری از همولیز.
ماهیت روش: برهمکنش یون های آهن و باتوفنانترولین سولفاته یک کمپلکس رنگی را تشکیل می دهد که میزان اشباع آن به روش فتومتریک تعیین می شود. برای به دست آوردن محلول شفاف، لازم است قوانین نمونه برداری از بیومتریال رعایت شود، اما برای تعیین دقیق چگالی نوری کمپلکس های آهن-لیگاند، آهن با استفاده از هیدروکسیل آمین و مواد شوینده (سدیم دودسیل سولفات) از هموگلوبین آزاد می شود. نتیجه آزمایش وجود و درجه آسیب شناسی را تعیین می کند. غلظت طبیعی آهن باید: باشد
- 14، 2 - 26.0 میکرومول در لیتر (مردان)؛
- 10، 6-21، 7 میکرومول در لیتر (زنان).
کمبود آهن معمولاً با از دست دادن خون، دریافت ناکافی رژیم غذایی، یا جذب ضعیف از دستگاه گوارش همراه است.
آزمایش کلسترول
کلسترول یک ماده آلی است که در دیواره سلولی بسیاری از موجودات از جمله انسان یافت می شود. برای تولید کوله کلسیفرول و هورمون های استروئیدی ضروری است. سطح کلسترول 3.37-5.2 میلی مول در لیتر طبیعی در نظر گرفته می شود. محتوای بالا یکی از دلایل اصلی تصلب شرایین است.
روش های رنگ سنجی برای تعیین کلسترول به شما امکان می دهد بیماری های عروقی را در مراحل اولیه تشخیص دهید. با توجه به نتایج پاتوآناتومیک در پیامد کشنده ایسکمی، غلظت الکل چربی دوست در بیماران6.5-7.8 mmol/L بود.
اصل روش رنگ سنجی این است که کلسترول توسط 3بتا هیدروکسی استروئید اکسیدوردوکتاز اکسید می شود و پراکسید هیدروژن آزاد می شود که p-aminoatipyrine را به یک ترکیب رنگی تبدیل می کند. محتوای کلسترول با اشباع رنگ آن تعیین می شود.
هنگام انجام آزمایش در کودک باید در نظر گرفت که غلظت کلسترول در دوران کودکی نباید از 4.1 میلی مول در لیتر تجاوز کند.
روش رنگ سنجی آنزیمی چیست؟
آزمایش های آنزیمی بر اساس استفاده از واکنش های آنزیم هایی با فعالیت بالا است. آنها به طور گسترده در شیمی تجزیه برای تعیین مواد مختلف - از یون های نیترات گرفته تا ماکرومولکول ها - استفاده می شوند.
روش های آنزیمی (آنزیمی) خاص هستند و امکان تجزیه و تحلیل برخی از مواد را در حضور سایر مواد مشابه از نظر ترکیب فراهم می کنند. رایج ترین روش ها بر اساس استفاده از آنزیم - گلوکز اکسیداز است. این آزمایش برای تعیین غلظت گلوکز در خون استفاده می شود. دقت آزمایش این امکان را فراهم می‌کند که از آن برای تنظیم دوز داروهای هیپوگلیسمی در بیماران مبتلا به دیابت نوع 2 استفاده شود.
روش اکسیدان گلوکز یکی از بهترین روش های کمی برای تعیین گلوکز به شمار می رود. هم خون (مویرگی) و هم سرم را می توان به عنوان بیومتریال استفاده کرد، اما پلاسما ترجیح داده می شود زیرا محتوای هماتوکریت کمتری دارد که بر دقت نتیجه تأثیر منفی می گذارد.
روش سینتیکی نورسنجی عمدتاً مورد استفاده قرار می گیرد. ماهیت آن در این واقعیت نهفته است کهنسبت تعیین شده گلوکز اکسیداز و پراکسیداز، برای مدت زمان معینی پس از شروع واکنش، سرعت تشکیل یک ترکیب رنگی متناسب با سطح گلوکز در نمونه خواهد بود. مزیت اصلی آزمایش این است که نتیجه تحت تأثیر وجود ترکیبات شخص ثالث در نمونه قرار نمی گیرد. این روش همچنین یک اشکال دارد - ابزارهای اندازه گیری گران قیمت از تولید کنندگان آلمانی یا سوئدی برای آزمایش مورد نیاز است.
نتیجه گیری
روش رنگ سنجی دقیق و آسان برای استفاده است. استفاده از آن در پزشکی امکان تشخیص زود هنگام تغییرات پاتولوژیک مختلف در بدن را فراهم می کند. با معرفی فن آوری های جدید، این روش در حال بهبود است و روز به روز محبوب تر می شود.
