طبق آمار سازمان بهداشت جهانی، در ۴۰ سال گذشته، ۲۵ میلیون نفر بر اثر ایدز جان خود را از دست داده اند. خسارت این عفونت بسیار زیاد است. معلوم شد که بیشتر مبتلایان در آفریقا بوده اند، جایی که این عفونت از آنجا آمده است. با HIV، تشخیص بیماری اهمیت ویژه ای پیدا می کند. درست است، هنوز هیچ درمانی برای HIV وجود ندارد، اما درمان زودهنگام می تواند عمر بیمار را طولانی کرده و کیفیت آن را بهبود بخشد.
تشخیص عفونت HIV
عفونت HIV در مراحل مختلف با روش های زیر تعیین می شود:
- ELISA - ایمونواسی آنزیمی.
- Western Blot.
- PCR - واکنش زنجیره ای پلیمراز.
- تست سریع.
روش PCR توسط بیوشیمیدان آمریکایی، کری مولیس، که در سال 1983 جایزه نوبل را برای آن دریافت کرد، توسعه یافت. امروزه این روش در پزشکی در تشخیص تمامی عفونت ها به دلیل دقت و محتوای اطلاعاتی پیشرو محسوب می شود. HIV از این نظر مستثنی نیست.
ماهیت تحلیل
هر سلول زنده حاوی RNA و DNA است. این اسیدهای نوکلئیک قابلیت خودکپی و خودتکثیر را دارند. برای هر عفونت، قطعات DNA منحصر به فرد هستند. ATدر مایعات بیولوژیکی، این قطعات اسیدهای نوکلئیک در گردش هستند. آنها توسط تجهیزات ویژه - راکتور - دستگیر و شناسایی می شوند. این اساس روش است. دستیار آزمایشگاه این قطعات را می شمارد. رتروویروس HIV از نظر RNA کنترل می شود. حتی با یک کپی از ذرات ویروسی، PCR می تواند آنها را شناسایی و شمارش کند.
خون وریدی اغلب به عنوان مایع آزمایش استفاده می شود. اجزای خاص این روش به ذرات ویروس متصل می شوند و آنها را قابل تشخیص می کنند، زیرا قطعات یافت شده چند برابر می شوند.
در مورد HIV، نتیجه وجود ویروس را می توان مدتها قبل از ظهور کلینیک به دست آورد. بنابراین PCR به دلیل حساسیت بالایی که دارد ارزش تشخیصی بالایی دارد. مزیت بزرگ PCR، تطبیق پذیری روش است. دوره کمون عفونت برای PCR مانعی ندارد.
هزینه تحقیق
روش PCR بسیار گران است. این یکی از معایب بزرگ آن است. به جدیدترین تجهیزات و دستیار آزمایشگاه بسیار ماهر نیاز دارد. با توجه به موارد فوق، تشخیص PCR در سکونتگاه های کوچک انجام نمی شود. شما فقط می توانید در کلینیک های تخصصی بزرگ آزمایش شوید.
هزینه آزمایش DNA HIV در کلینیک‌های مسکو از 2800 روبل شروع می‌شود، بار ویروسی (RNA ویروسی در پلاسما) با PCR تعیین می‌شود - از 8800 روبل، و مقاومت HIV به مهارکننده‌های پروتئاز - از 16500 روبل. همانطور که می بینید، قیمت ها بسیار بالا هستند. PCR را می توان به صورت رایگان در کلینیک های عمومی تحت سیاست MHI انجام داد. مهم،که این روش می تواند به صورت ناشناس انجام شود. در رجیستری، بیمار شماره ای دریافت می کند که با آن می تواند نتیجه را دریابد. در مراکز پزشکی مدرن، حساب های شخصی مشتریان وجود دارد که این داده ها در آن وارد می شود.
اهداف تحقیق
تشخیص PCR برای HIV در چنین مواردی تجویز می شود:
- تشخیص عفونت در کودک متولد شده از مادر یا ناقل بیمار برای تعیین عفونت داخل رحمی.
- اگر ELISA نتایج مشکوکی داشت (PCR برای HIV در این مورد به تشخیص نهایی کمک می کند).
- برای تشخیص محتوای کمی ویروس در بدن.
- با ایمونوبلات مثبت، آنها با PCR یکدیگر را تکمیل می کنند.
- آزمایش اهداکنندگان.
- برای تشخیص زودهنگام HIV.
- برای تعیین اثربخشی و مقاومت به ART.
مزیت این تجزیه و تحلیل این است که PCR برای HIV حتی برای کودکان زیر یک سال نیز قابل انجام است.
تحقیق اغلب برای تشخیص اولیه انجام نمی شود، بلکه در حال حاضر در مرحله درمان است. تشخیص اولیه مطالعات سرولوژیکی است (آنها سطح آنتی بادی های HIV را تعیین می کنند). اگر یک نتیجه مثبت کاذب تکرار شود، ممکن است با بار ویروسی کم باشد.
PCR زمانی HIV را تشخیص می دهد که هنوز آنتی بادی برای آن وجود نداشته باشد. روش الایزا در این مورد جوابی نخواهد داد.
و PCR برای HIV از قبل مثبت خواهد بود. اما علائم این دوره HIV غیر اختصاصی است. بیمار ابتدا برای مدت طولانی و ناموفق برای ARVI توسط یک پزشک عمومی درمان می شود. باید در نظر داشت که تشخیص HIV فقط بر اساس استPCR قرار داده نمی شود، لازم است آزمایشات جامع دیگری را بگذرانید. روش PCR اغلب برای موارد دشوار کمکی است.
آماده شدن برای تجزیه و تحلیل
قبل از انجام PCR برای HIV، 2 روز قبل از آزمایش، نباید غذاهای چرب و الکل مصرف کنید. همچنین بهتر است فشار روحی و جسمی نداشته باشید. اگر برای بیمار یک دوره تحریک ایمنی تجویز شود، 2 هفته قبل از تجزیه و تحلیل قطع می شود.
خون بهتر است در صبح گرفته شود. سایر مایعات بیولوژیکی بدن (اسپرم، ترشحات واژن) نیز قابل بررسی هستند، اما خون بهترین ماده است. بزاق، عرق، ادرار و اشک استفاده نمی شود، زیرا محتوای ویروس در آنها حداقل است.
مزایای PCR برای HIV
از مزایای روش احتمال بسیار کم نتیجه مثبت کاذب، جهانی بودن واکنش برای هر مایع بیولوژیکی بدن است. آنالیز دامنه وسیعی دارد:
- می توان از یک خونگیری برای تشخیص عفونت های مختلف استفاده کرد.
- تکنیک فوری است، نتیجه از روز بعد آماده است.
- اعتماد بین 85 تا 98٪ است.
- وجود HIV را می توان 10-14 روز پس از عفونت تعیین کرد (هنوز آنتی بادی وجود ندارد).
- بدون محدودیت سنی، می توان بلافاصله از بدو تولد انجام داد.
معایب روش
معایب PCR به شرح زیر است:
- هزینه تجزیه و تحلیل.
- نیازمند تجهیزات پزشکی پیشرفته.
- نیازمند دستیار آزمایشگاه و پزشک مجرب،تجزیه و تحلیل گیرنده.
- واکنش بسیار حساس است، بنابراین خطا ممکن است 20% باشد.
- ممکن است منجر به یک نتیجه مثبت کاذب شود اگر بیمار فرآیندهای خودایمنی، انکولوژی، عفونت های مزمن داشته باشد.
- نظافت ویژه محیط آزمایشگاه ضروری است، زیرا ویروس می تواند از هوا وارد آنالیز شود. سپس نتیجه اشتباه خواهد بود.
برای آزمایشگاه هایی که PCR انجام می دهند، برای بهبود کیفیت تشخیص، اقدامات سختگیرانه ویژه ای بر اساس سیستم SanPiN برای کنترل داخلی ایجاد شده است. علاوه بر این، تمام قوانین کار با این تکنیک باید رعایت شود:
- لازم به رعایت دقیق اطلاعات روی لوله های آزمایش است.
- قبل از نمونه گیری خون، دوباره نگاه کنید و مطمئن شوید که آنالیز برنامه ریزی شده است.
- پرستار باید لوله ها را به درستی برچسب بزند.
- دستیار آزمایشگاه باید به درستی همه دستکاری‌ها را با مواد بیولوژیکی انجام دهد تا از آلودگی متقابل جلوگیری شود.
- سیستم آزمون باید از کیفیت عالی برخوردار باشد.
فقط در صورت رعایت همه این شرایط، خطا در پاسخ می تواند فقط حدود 2٪ از قسمت ها باشد.
مدت آنالیز
بسیاری علاقه مند هستند که PCR برای HIV برای چه مدت آماده باشد. تشخیص بیش از 8 ساعت طول نمی کشد. ممکن است بیمار در روز بعد پاسخ دریافت کند. آزمایش سریع ظرف 2 ساعت انجام می شود.
قابلیت PCR
علی رغم مزایای فراوان، PCR یک روش تشخیصی ایده آل در نظر گرفته نمی شود. در صورت لزوم با او تماس گرفته می شودنیاز به انجام آزمایش های غربالگری برای وجود HIV در بدن.
چه زمانی برای تجزیه و تحلیل خون گرفته می شود؟
چه مدت باید PCR برای HIV انجام داد؟ نتیجه قابل اعتمادی را می توان از قبل در هنگام مصرف خون 4-4 روز پس از عفونت ادعایی به دست آورد. پس از 2 هفته، قابلیت اطمینان HIV 98٪ و با یک دوره 5 روز - 80٪ خواهد بود. وجود یک نتیجه منفی در PCR برای HIV قابل اعتماد خواهد بود، اما برای یک نتیجه کاملا دقیق، ELISA نیز انجام می شود.
آنالیز الایزا تنها در صورت وجود آنتی بادی علیه ویروس موثر خواهد بود، این زمان می تواند از 1 تا 3 ماه تا شش ماه طول بکشد. از آنجایی که ELISA احتمال بیشتری دارد (98% -99.9%)، PCR را نمی توان یک تست تاییدی 100% برای وجود عفونت HIV نامید. اما از سوی دیگر، این تنها تکنیکی است که در آن نیازی نیست منتظر ظاهر شدن آنتی بادی ها باشید.
با HIV، PCR می تواند اطلاعاتی در مورد اثربخشی ART، مرحله بیماری HIV و تعداد VNs (ارزیابی کمی وجود HIV در بدن) ارائه دهد. این به شدت و میزان تغییر صحبت می کند.
اگر آنتی‌بادی‌هایی در خون وجود داشته باشد، آزمایش PCR برای HIV نیز ضروری است، اما وجود آنها از نظر بالینی اعتبار عفونت HIV را نشان نمی‌دهد.
آنها نه تنها برای عفونت و رابطه جنسی تصادفی آزمایش می شوند. موارد دیگر:
- برنامه ریزی بارداری.
- عملیات آتی.
- سکس گاه به گاه.
- برخی از مشاغل برای پذیرش در کار (معلمان، پزشکان و سایر پرسنل پزشکی) به این آزمون نیاز دارند.
- زندانی.
- بیماران سل.
- کارمندان وزارت شرایط اضطراری و پلیس.
- از تعطیلات از کشورهای عجیب و غریب بازگشته است (اگر می خواهید مطمئن شوید که عفونت وجود ندارد).
- روسپی ها.
- دانشجویان خارجی.
- Drugs.
همچنین علائم خاصی در بیمار ممکن است آزمایش HIV را مجبور کند:
- کاهش وزن ناگهانی.
- اسهال که بیش از 3 هفته طول می کشد
- دمای بالا بی دلیل برای مدت طولانی.
- غدد لنفاوی متورم.
- علت غیرقابل توضیح پنومونی، کاندیدیازیس، و غیره.
رمزگشایی آنالیز در اختیار پزشک معالج است نه دستیار آزمایشگاه.
PCR یا ELISA، کدام بهتر است؟
هنگامی که PCR-تشخیص RNA ویروس HIV هم از نظر کیفی و هم از نظر کمی تشخیص داده می شود. این تجزیه و تحلیل به وضوح یک پاتوژن خاص را شناسایی می کند حتی اگر چندین پاتوژن با واکنش متقابل وجود داشته باشد. مواد بیولوژیکی را می توان حتی به صورت خشک استفاده کرد. نکته منفی حساسیت بالای PCR است، زمانی که یک نتیجه مثبت کاذب را می توان با حضور حتی مقدار کمی DNA خارجی روی ابزارها یا یک لوله آزمایش داد.
وظیفه و امکان الایزا تعیین وجود آنتی بادی برای یک رتروویروس است. اگر چه دقت آن 99% است، در مراحل اولیه قابل اجرا نیست.
آزمایش کیفی HIV
PCR با کیفیت بالا برای HIV وجود ویروس را در بدن تعیین می کند. نتایج در این مورد به این صورت خواهد بود: مثبت، مثبت کاذب، منفی. اما این مطالعه اطلاعاتی در مورد میزان رتروویروس ارائه نمی دهد. چنین تحلیل کیفیزمانی که عفونت HIV قبلاً با روش های دیگر در بدن شناسایی شده باشد، نامناسب است.
کنترل اثربخشی درمان با PCR با کیفیت بالا غیرممکن است.
کمی HIV
فقط توسط افراد آلوده به HIV به منظور شمارش تعداد نسخه‌های RNA ویروس در یک محصول بیولوژیکی انجام می‌شود.
هدف از چنین مطالعه ای نظارت بر درمان در حال انجام و شناسایی مقاومت ویروس در برابر آن است. درمان ضد ویروسی در چنین محاسباتی کورکورانه توسط پزشک تجویز نمی شود، بنابراین موثرتر خواهد بود. PCR کمی برای عفونت HIV اغلب انجام می شود. این تجزیه و تحلیل به صورت کپی/ml خون نمایش داده می شود.
چه نتایجی می توان داد:
- RNA ویروس وجود ندارد یا بسیار کوچک است (حدود 20 کپی در میلی لیتر). تشخیص قطعی وجود ندارد.
- از 20 - تا 10 تا نسخه 6 درجه / میلی لیتر - تشخیص قابل اعتماد است.
- بیش از 106 کپی در میلی لیتر - VN بالا.
آزمایشگاه ها می توانند آزمایش PCR را در زمان واقعی برای HIV انجام دهند. این امر مستلزم مشاهده و ارزیابی عددی تجمع محصولات PCR با ثبت خودکار نتایج است.
